Calcular la longitud en píxeles de una imagen

¿Puedo saber cuáles son las formas de calcular la longitud de 1 píxel en centímetros? Las imágenes que tengo son 640x480. Me gustaría comparar 2 píxeles en diferentes lugares de la imagen y encontrar la diferencia en la distancia. Por lo tanto, tendría que averiguar cuál es la longitud del píxel en centímetros. Gracias.

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